Worm 710 Posted October 13, 2009 Ben je al van start??? Dampende groet, WOrm Share this post Link to post Share on other sites
TissueTeler 0 Posted October 13, 2009 Sorry worm, Was even vertraging in gekomen. Ik wou vooraf DVD zien. Omdat ze de inhoud van het pakket aangepast hebben. Deze komt dus niet meer geheel over een met wat in de handleiding staat. Moest het helaas ff verplaatsen naar Donderdag. I.v.b met verplichtingen van vandaag. En morgen natuurlijk horti fair. Share this post Link to post Share on other sites
TissueTeler 0 Posted October 17, 2009 wat voor plantmateriaal ga je gebruiken? Weefselkweek werkplan We gaan bij deze experiment proberen om callus op te kweken van bijv. de petiole (nerve) van de cannabisplant. Dit omdat bij eerdere onderzoeken is geconcludeerd dat dit de hoogste callus yield oplevert. Mogelijke explant bronnen zoals: petiole bloemknop oksel blad shoot apicale meristem (bevat stamcellen), dit zijn primordia van organen zoals de bloem enblad florale meristem, ontstaat door een conversie van shoot apicale meristem, onder invloed van eenkoudere temperatuur (volgens de literatuur: een paar dagen tussen 0 en 10 graden) en minstens8,5 uur donker per etmaal. Dit zorgt dat de explant wordt aangezet tot bloe en dus zichconcentreert op bloemen. Medium Bereiding moet ik nog uit typen Verdeel de medium over de petrischaaltjes. Om ervoor te zorgen dat het 100% steriel is moeten de schaaltjes nu in een autoclaaf worden behandeld op 121 graden en 15 minuten, volgens eerdere onderzoeken. Omdat we dit niet kunnen doen, gebruiken we een snelkookpan. Procedure Neem een explant Zet ze in bleekoplossing voor 10 minuten (10% huishoudelijk) om de oppervlak te steriliseren Desinfecteer de werktafel Vul drie bakjes met gedistilleerd water Dompel het pincet in 70% alcohol, steriliseer het door het eventjes boven vuur te houden en dusde alcohol eraf te branden, laat het afkoelen en gebruik het vervolgens om de explantjes van debleekoplossing te pakken en in elk van de drie bakjes met schoon water te reinigen. Je hebt dusdrie 'washes'. Steriliseer ook het mesje met de vlam, laat het afkoelen en gebruik het om de randjes van deexplant tot 1 mm eraf te snijden, aangezien dit deel dood is gegaan in de bleekoplossing doorhet direct contact. Gebruik het pincet om een explantje in de groeimedium te plaatsen. Druk het heel licht in het medium. Zet de kweekbakjes in een warme en goed belichte lokatie. In geval van contaminatie zijnmicro-organisme kolonieen binnen een week te zien. Share this post Link to post Share on other sites
lowieke 0 Posted October 17, 2009 Vette topic Tissue T. Ik zag dat plaatje van die gammakast met ingebouwde tl balken. laat ik dat idee nou net ook in mijn hoofd hebben. ga dit zeker volgen. gtrz low Share this post Link to post Share on other sites
TissueTeler 0 Posted October 17, 2009 Ik zag dat plaatje van die gammakast met ingebouwde tl balken. laat ik dat idee nou net ook in mijn hoofd hebben. Ja dat werkt echt super goed. Ik heb deze tl bakken gebruik. TL montagebalk. Die zijn even breed als de kast. Share this post Link to post Share on other sites
TissueTeler 0 Posted October 17, 2009 Zo net even media gemaakt: 1. Begonnen met demin water: 2. Suiker afgewogen: 3. MS + vitamine toegevoegd. 4. Hormonen en Conserveermiddel toegevoegd. 5. Medium toegevoegd: 6. Old school pH papier gebruikt uit de kit: Ik heb de pH bijgesteld (pH- HPO4). 7. Dit heb ik gecontroleerd met behulp van pH meter. Ik zat op een pH 5.1. Misschien dat ik scheel ben maar ja. Dit heb ik met behulp van pH+ KOH. Bijgesteld tot 5.8 8. Ik heb de bakjes klaar gezet: 9. Vervolgens heb ik het medium voor 8 min in de magnetron gedaan. 10. Met behulp van een 25 ml pipet heb ik de bakjes gevuld. 11. Bakjes in de snelkookpan gedaan. 12. 50% van de bakjes gesteriliseerd met UV lamp Share this post Link to post Share on other sites
lowieke 0 Posted October 17, 2009 Ziet er veel belovend uit dit. Heb je zeker vaker gedaan bedankt voor die tip van de tl's. ik heb jammer genoeg al armatuurtjes van de gamma. Die gaan ook wel werken, maar die je net liet zien zijn toch geschikter. waarvan ga je kweekjes nemen dan, ik neem aan dat je 1 of meerdere soortjes gaat opkweken. cool dit, cannalogie 1op1 grt low Share this post Link to post Share on other sites
TissueTeler 0 Posted October 17, 2009 waarvan ga je kweekjes nemen dan, ik neem aan dat je 1 of meerdere soortjes gaat opkweken. Ik heb nu helaas maar twee soortjes tot mijn beschikking. NLX en Silver Haze. Mocht iemand op het forum nog wat exotische soortjes hebben. Zou het super mooi zijn als ik hier wat kleine stukjes van kan krijgen. Voor TT heb je niet echt veel nodig. Je kan me eventueel een PM sturen. Het zou het makkelijkst zijn als we ergen in ZH kunnen afspreken. Share this post Link to post Share on other sites
TissueTeler 0 Posted October 17, 2009 13. Media 30, 40, 45 en 50 min in de snelkookpan. Foutendiscussie: 1. Het medium dat 30 minuten in de snelkookpan heeft gezeten is niet hard geworden. 2. Het medium dat 40, 45 en 50 min heeft gekookt wel. Share this post Link to post Share on other sites
Doc 12 Posted October 17, 2009 Zou het super mooi zijn als ik hier wat kleine stukjes van kan krijgen.Voor TT heb je niet echt veel nodig. Je kan me eventueel een PM sturen. Ik weet niet of het gaat lukken om een stukje weefsel via pm te sturen Share this post Link to post Share on other sites
TissueTeler 0 Posted October 17, 2009 Ik weet niet of het gaat lukken om een stukje weefsel via pm te sturen Daar wordt aan gewerkt. Volgens mij zit dat in de volgende versie van het Forum . Share this post Link to post Share on other sites
TissueTeler 0 Posted October 19, 2009 14. Zo we kunnen beginnen. Alles eerst even opgesteld. 15. Ik heb eerst de stukjes weefsel klein gesneden. 16. Weefsel 10 min gewassen in een oplossing van 10% chloor. 17. Vervolgens 30 sec in een 70% alcohol oplossing gewassen. 18. Daarna 3x gespoeld met gesteriliseerd water. Share this post Link to post Share on other sites
guesswho? 11 Posted October 19, 2009 Ik neem aan dat je gelijk verder bent gegaan met stap 19? Het weefsel plaatsen in het medium Of ben ik te snel? Grtz Guesswho? Share this post Link to post Share on other sites
TissueTeler 0 Posted October 19, 2009 Foto's komen er zo aan. Ben ff flimpje aan het kijken. Was nog best inspannend werkje. Share this post Link to post Share on other sites
guesswho? 11 Posted October 19, 2009 Dat geloof ik graag Maar het ziet er zeer vakkundig uit zeg! Is de film ook ergens online te bewonderen? Of te downloaden... Grtz Guesswho? Share this post Link to post Share on other sites
TissueTeler 0 Posted October 19, 2009 Zo nog ff laatste foto's uploaden. 19. Na het wassen heb ik de stukjes gesneden (eventueel Necrose verwijderd). 20. Vervolgens verschillende onderdelen van de plant in de bakjes gedaan. Hiervoor heb ik wat weefsel gebruikt afkomstig van NLX en Silverhaze moeder. 21. Na 2 uurtjes wassen en snijden 26 bakjes met weefsel als resultaat. Hier moet bij worden vermeld dat het meeste werk in het wassen zit. Het zou weinig uitmaken of je 26, 100 of 1000 stukjes wast. Het gaat allemaal in 1 grote pot. 22. Alles vervolgens netjes in de propegator gestopt. Deze heb ik ingesteld op 26 Graden. De lampen staan op 18 uur 1x30W T5 en 1X30W T8 Lamp. En nu komt het wachten . Ik zal proberen 2x per week een foto te maken. Zaterdag ga ik nog medium maken van caisson. Hier kan ik wat meer spelen met de verschillende hormonen. Bovendien kan ik stoffen zoals nicotine toevoegen. Wat volgens de literatuur gunstig is voor onze planten. Share this post Link to post Share on other sites
TissueTeler 0 Posted October 19, 2009 Is de film ook ergens online te bewonderen? Ik was The Tournament aan het kijken. Klik Maar je bedoeld zeker die film van tisseu culture? Nee kon hem niet online vinden. Als het goed werkt zal ik wel een intructie filmpje in het Nederlands maken. En deze plaatsen. Share this post Link to post Share on other sites
EmTee 2 Posted October 19, 2009 En nu komt het wachten . Ik zal proberen 2x per week een foto te maken. En hoeveel weekjes duurt het dan voor er iets herkenbaars ontstaat? Als het goed werkt zal ik wel een intructie filmpje in het Nederlands maken.En deze plaatsen. Nou, als je dat doet, dan ben je nog beter bezig dan je nu al bent EmTee Share this post Link to post Share on other sites
TissueTeler 0 Posted October 19, 2009 En hoeveel weekjes duurt het dan voor er iets herkenbaars ontstaat? Laatste keer kreeg ik na ongeveer 1 week klompjes Callus (Wondweefsel). Het is de bedoeling dat hier zoveel mogelijk totipotente cellen in ontstaan (soort stamcellen). Deze klompjes kan je met behulp van hormonen sturen in hun differentiatie proces. Voordat ik iets heb wat je kan planten zal ik een week of drie verder zijn. Als het allemaal mee zit. Zal ik daarna een kweekje doen met plantjes uit de Tisseu Culture. Hoelang het aanslaan van Tissue Culture's duurt weet ik niet. Maar we zullen zien. . Share this post Link to post Share on other sites
guesswho? 11 Posted October 19, 2009 Duidelijke uitleg zo Zal de film eens gaan bekijken Grtz Guesswho? Share this post Link to post Share on other sites
Guest elmanito Posted October 20, 2009 Herinneringen van botanie praktijk komen wanneer ik die foto's weer zie, alleen ik hoop dat je wel gevrijwaard blijft van schimmels, want dat was tijdens de praktijk altijd een ramp als je weer een of andere moron de dekseltjes ging optillen om te kijken hoe het met de klompjes ging. Met welke hormonen ga je mee werken??? Namaste Share this post Link to post Share on other sites
sannie 187 Posted October 20, 2009 Goed uitgelegd met mooie foto's om te ondersteunen bedankt voor het sharen greetz sannie Share this post Link to post Share on other sites
TissueTeler 0 Posted October 20, 2009 Met welke hormonen ga je mee werken??? De hormonen waar ik mee ga werken zijn: 1. Auxine 2. Cytokininen 3. Gibberellinezuur 4. Ethyleen In eerste instantie wil ik starten met een power van tien dus 120 testen. Share this post Link to post Share on other sites
TissueTeler 0 Posted October 24, 2009 Nog even een TC Flow Chart. Helaas is voor Tissue Culture wel een beetje geduld nodig. We hebben in ieder geval nog geen bakjes met schimmel. Share this post Link to post Share on other sites
gamezz 0 Posted October 25, 2009 is er al ontwikkeling in de plantjes? ik kijk zeker 5x per dag of er nieuwe foto's zijn , ik vind dit zéér boeiend Share this post Link to post Share on other sites