panjaabie 2 Posted March 9, 2009 oefening baart kunst maar vordat het eindelijk goed lukt ben je nog wel ff bezig hoe dan ook dit is wel de shit, planten zijn echt fantastisch hehe probeer dit maar met een muis ik hoop dat er ook wat fotos bij komen als je het gaat proberen Quote Share this post Link to post Share on other sites
Snowy 1 Posted March 17, 2009 Ook muizen cellen en weefsels kun je in een medium (voedings oplossing) met de juiste stofjes en hormonen erin kweken hoor.. Gewoon Tissue Cultered Cell's De exacte samenstellingen zijn veel werk om uit te zoeken.. dus logisch datmensen die dit kenenn het nog niet gedeeld hebben Laters, Snowie Quote Share this post Link to post Share on other sites
arjan 0 Posted April 9, 2009 Oké de juiste samenstelling van de voedingsstoffen moet nog uit gezocht worden, maar hoe zit het met de steriele ruimte waar je in moet werken. Hoe hebben jullie dit opgelost, kan hier nou niet echt zeggen dat ik er warm voor loop om een kamer te gaan verbouwen tot één steriele ruimte met micro filters en de hele zooi. Quote Share this post Link to post Share on other sites
Snowy 1 Posted May 13, 2009 Hey Arjan, Gewoon een kleine steriele ruimte creeren volstaat ook.. iets van een lamminaireflow kast welke zorgt voor een overdruk binnen je werkruime (een bureau blad met een overkapping eromheen met bovenin een in de kast blazende vernilator met een filter) kun je denk ik vrij eenvoudig en op iedere schaal in elkaar zetten. Hieronder een voorbeeldje van een commerciële laminaireflowkast ookwel laf-kast. Het steriel werken binnen deze kast is daarna iets waar je heel erg op zult moeten letten. Alles wat je de kast binnen brengt kun je het beste afnemen met alcohol van min 70% of een bleek oplossing en ook de kast zelf zul je aan de binnenkant voor en na gebruik met een zelfde oplossing moeten sterieliseren. Is het zo beter thuis uit te voeren Arjan? Succes iig en ik ben benieuwd Laters, snowie Quote Share this post Link to post Share on other sites
Doc 12 Posted May 13, 2009 Oké de juiste samenstelling van de voedingsstoffen moet nog uit gezocht worden. Dit heet het protocol en das meteen de hele grap. Quote Share this post Link to post Share on other sites
Snowy 1 Posted May 14, 2009 Hey Doc Zie je qwel.. soms ben ik nog op t forum te vinden Een protocol is het stappenplan of voorschrift dat je volgt voor een bapaalde bepaling of voor het clonen met een voedingsbodem. De samenstelling van deze bodem is de mediumsamenstelling en deze moet af gestemd worden op je plant en het doel van de proef. Wanneer je bijvoorbeeld wilt dat je een rooting voedingsbodem maakt moeten er specifieke wortelaanmaak stimulerende hormonen in de juiste hoeveelheid toegevoegd worden. Wil je om maar iets te noemen een klein moedertje onderhouden met mini internodes om van iedere node een nieuwe kloon te maken dan moet er een hormoon (wederom precies de juiste hoeveelheid) bij dat de scheut proliferatie en internode vorming stimuleerd, een auxine bijvoorbeeld. Het vast stellen van de juiste hoeveelheden van de hormonen welke nodig zijn om je plant zoals jij wenst te laten ontwikkelen is het hele werk daar hebbie gelijk in. Opzich iets dat met een simpele proef wel te checken valt maar door de hoge kosten verbonden aan de hormonen en de minuscule hoeveelheden waar het om gaat maken het lastig. Maar met een aantal fix aantal reageerbuizen, een x aantal hormonen, een goede pipet en een basis medium als MS basal medium is de proef prima in het klein uit te voeren. Het is het startkapitaal dat nodig is om dingen als hormonen (duur) in te kopen dat amateur pogingen tot plant weefselkweek eenigszins de kop in drukt, danwel belemmerd. Er zijn complete setjes verkrijgbaar maar de kosten hiervan zijn ook nog steeds aan de hoge kant. Toekomst zal het leren Doc, we will strive towards avordable plantissue-culture solution. , we zullen streven naar een betaalbare plantweefsel cultuur oplossing. Laters, Snowie Quote Share this post Link to post Share on other sites
Grazz85 0 Posted June 10, 2009 Een topic nr mijn hart Zit nu nog volop in examens maar eens uitkijkend naar volgend jaar leerde me dat één van mijn vakken weefselteelt is. Het zal dus wel nog ff wachten zijn voor ik er wat meer over weet, maar aangezien ik er ook practica van heb zal ik toch proberen meer te weten te komen via assistent. Wie weet lukt het me wel om wat agar mee te smokkelen, en andere benodigheden (heb al een kleine collectie ) Zal één van de eerste keren zijn dat ik met zoveel interesse nr een vak toeleef Quote Share this post Link to post Share on other sites
whazzup 165 Posted June 10, 2009 iedere leverancier van spullenboel voor deze markt publiceert ook haar protocollen, zoals hier. Een goede startplaats vind je bij de plant tissue culture information exchange. Ook wel leuk: http://www.weefselkweek.nl/ en deze dude heeft een aantal leuke video's kits zijn te koop voor niet eens zoveel geld - inclusief mediamix en dat is nou net de kneep, die moet je ontwikkelen voor je plant. Quote Share this post Link to post Share on other sites
Snowy 1 Posted June 11, 2009 @ Grazz85 Succes met je examens.. maar heb je nog herkansingen dan want ik dacht dat alle examens al zo'n beetje geweest waren. Of bedoel je tentamens van je HBO of WO studie? ALs ik zo vrij mag zijn je te vragen welke studie wil je dan volgendjaar starten of volg je nu al? Ben benieuwd, heb het zelf ook als vak gehad en vond t ook ontzetten leuk @ Whazzup Alle media zijn geoptimaliseerd voor een soort plant.. Je zult dus moeten kijken naar de specifieke voedingsbehoeften van je wietplant om deze goed op te kunnen kweken in een tissueculture setting. Zo kan ik bijv al vertellen dat je van de kits die verkrijgbaar zijn met MS medium het moet verdunnen naar 1/2, 1/3 of 1/4 strenght MS medium. De wietplant heeft namelijk niet zulke extreem hoge voedings behoeften als een tabaksplant in een tissueculture setting. Daarnaast zijn deze media al voorbereid met de hormonen in het zakje, dus reeds toegevoegd aan het MS medium, het is fijner om de hormonen los erbij te hebben zodat je de concentraties hiervan kan gaan variëren opzoek naar het mooiste resultaat. Wat dan opvalt is dat de kitjes die te krijgen zijn met losse hormonen en de losse hormonen opzichzelf zwaar over prijs zijn.. Hormonen zijn duur.. maar niet zo duur.. -->Streven is naar een nederlandse suppliër voor deze benodigdheden of kitjes zodat shipping niet meer bij draagt aan de kosten van een dergelijke kit. Laters, Snowie Quote Share this post Link to post Share on other sites
Grazz85 0 Posted June 17, 2009 @ snowy: In belgië zitten die dingen beetje anders in elkaar, morgen mijn laatste examen( ben er vroeg van af dit jaar) biochemie. Ik volg industrieel ingenieur tuinbouw, nog jaartje of twee te gaan. Vooral nu wat algemene vakken gehad, vanaf volgend jaar ist meer toegepast op tuinbouw haha, de zaadbedrijven mogen mij al pm'en als ze een breeder in spe zoeken Miss minder precies, maar kan je niet ook verschillende hoeveelheden stekpoeder toevoegen aan je agar? Hier zitten toch ook hormonen in hé, mijne bevat 0, 25% 3-indolylboterzuur(=IAA) Als je dan je molaire conc wil berekenen moet je natuurlijk wel nog de molaire massa kenne, maar dat is valt wel op te zoeken/ te berekenen Quote Share this post Link to post Share on other sites
cannabusinesss 50 Posted June 20, 2009 Ik heb ook een vraag over de lowryders die ik heb staan, ik heb 25 lowryders waarvan 6 mannen die ik erbij heb laten staan maar zover ik kan zien zijn alleen de hoofdtoppen bestoven. Hoe kan ik het beste het stuifmeel opvangen en zo de andere topjes van de plant bestuiven.. Greetz Quote Share this post Link to post Share on other sites
keesthemad 8 Posted June 20, 2009 Miss minder precies, maar kan je niet ook verschillende hoeveelheden stekpoeder toevoegen aan je agar? Hier zitten toch ook hormonen in hé, mijne bevat 0, 25% 3-indolylboterzuur(=IAA) Als je dan je molaire conc wil berekenen moet je natuurlijk wel nog de molaire massa kenne, maar dat is valt wel op te zoeken/ te berekenen En de ballaststoffen ? Die wil je niet in je medium krijgen hé. Kees. Quote Share this post Link to post Share on other sites
Grazz85 0 Posted July 3, 2009 Nja, ergens heb je wel een punt, maar ik denk dat die ballaststoffen ook weer niet zoveel kwaad zullen kunne, probleem is natuurlijk dat je niet weet wat die ballaststoffen zijn hé... Quote Share this post Link to post Share on other sites
kasperfish 0 Posted July 3, 2009 zeer interessant! een goede voedingsbodem voor Cannabis is het volgende: Murashige en Skoog medium met Gamborg B5 vitamine (MB) aangevuld met 5 µM 2,4-dichlorophenoxyacetine zuur(2,4-D) en 1 µM kinetine, 3% sucrose, en 8 g l−1 agar. een klaargemaakt medium kan je bestellen bij kitchenculturekit. of als je alles zelf wil mixen zijn ook alle andere stoffen (regulatoren/hormonen enzo) daar beschikbaar. ze hebben trouwens ook een goede dvd waar alles perfect wordt uitgelegd, een aanrader. voor cannabis kan je denk ik best de jonge stengels gebruiken en het planten materiaal zo trimmen dat elk plantaatje twee okselknopen (tegenoverstaande) heeft. du hoe meer internodes de plant heeft hoe meer "kloontjes" je er van kan maken (elke internode is een nieuwe plant ). deze okselknopen zijn belangrijk omdat hier ongedifferentieerde cellen in zitten die onder juiste omstandigheden (triggeren met hormoon!) uitgroeien. je zou het plantaat nog eens overlangs kunnen doorsnijden. in theorie blijft het zelfs mogelijk zolang er maar ongedifferentieerde cellen aanwezig zijn in de combinatie met de goede planthormonen (ook andere plantendelen zijn dan bruikbaar->alle groeizones!). hoe kleiner het stukje, hoe kleiner de overlevingskans. dus als je dit thuis wil gaan proberen is het naar mijn inziens het best zoals op de tekening hierboven (eventueel nog eens overlangs doorsnijden->dan wel horz in de voedingsbodem leggen he ) grtzz edit: het is zeker en vast niet makkelijk maar wel haalbaar! het is eigenlijk "advanced stekken"... Quote Share this post Link to post Share on other sites
keesthemad 8 Posted July 3, 2009 Normaal zet je daar een bron bij kasper... Kees. Quote Share this post Link to post Share on other sites
kasperfish 0 Posted July 3, 2009 @kees: komt van zowat overal. boeken en cursussen... het recept voor het medium is eigenlijk een standaard (Murashige en Skoog) dat wordt aangevuld. het precieze recept heb ik eens opgeschreven omdat het mij wel interessant leek. ik meen mij te herinneren dat het een onderzoek was van Feeny. voor de rest heb ik mijn gezond verstand gebruikt ps: je kan zelfs gaan tot hoopjes celletjes als plantaat! dat is dan wel super advanced mega cloning. het feit dat je nog een stukje stengel nodig hebt is omwille van het sappentransport in tact te houden. door dit transport worden er dan bouwstoffen en hormonen uit de voedingsbodem naar de cellen gebracht. de ongedifferentieerde cellen groeien dan uit in functie van de hormoonbalans die in een relatief groot stukje plantenmateriaal nog redelijk door de plant zelf wordt gereguleerd. dus wil je nog kleiner gaan, zodat de transportstructuren zijn beschadigd dan moet je de nodige cellen eerst scheiden en hiermee een suspensie maken die op de voedingsbodem kan worden aangebracht (andere mogelijkheden mogelijk). dan is het mogelijk extreem veel kloontjes te maken met weinig plantenmateriaal (dit moet wel ongedifferentieerde cellen bevatten) maar de uitval is in professionele omstandigheden (afh van de plantensoort ) 10-50% en hoger. Quote Share this post Link to post Share on other sites
kasperfish 0 Posted July 4, 2009 okee, heb nog wat opzoekingswerk verricht. Cannabis kan je het beste vermenigvuldigen (via weefsel cultuur) dmv van het opkweken van callus. callus zijn in feite meristematische cellen (dus ongedifferentieerde cellen vergelijkbaar met dierlijke stamcellen). deze cellen kunnen uitgroeien tot eender welke cel onder invloed van de juiste regulatoren/factoren. om callus op te kweken moet je explantaten maken die meristeem cellen bevatten. je hebt apicaal meristeem dat zorgt voor de lengte groei maar ook lateraal meristeem dat zorgt voor breedte groei (bijv dikker worden van de stengel). het is het beste om de laterale meristeemcellen te gebruiken. deze zitten in jonge blaadjes (die worden breder), jonge stengels (idem), worteltapjes,... Als je het explantaat hebt geïsoleerd dan moet je dus eerst hiervan callus cellen op kweken. dit moet op een voedingsbodem met regulatoren die de callusvorming induceren/triggeren. deze callus cellen zijn heterotroof en halen suikers uit de voedingsbodem. vervolgens kunnen de calluscellen worden versneden en worden overgebracht in aparte bokalen met een voedingsbodem waar hormonen inzitten voor wortel- en sheuthormonen. tijdens deze fase moet het "plantje in wording" autotroof worden wat geleidelijk gebeurt. hierbij is acclimatisering belangrijk alvorens het plantje in echte grond te plaatsen. het hele proces is niet zo moeilijk maar moet zeer steriel gebeuren. hier spreekt men van transgenic cannabis omdat er vreemde genen zijn ingebracht dmv een buwuste gemodificeerde bacteriële besmetting in het stadium van callus cellen. deze bacterie brengt het vreemde dna (lees gen) in de cel waar het wordt opgenomen in het dna van de plantencel. de genetisch gemanipuleerde callus groeit verder (nadat de bacterie wordt gedood dmv antibioticum). de callus wordt dan op een root en shoot medium geplaatst en groeit dan uit tot een plantje. zo hebben ze al een fluorescerende wiet plant gemaakt (met een gen uit vuurvliegjes). wetenschappers hebben ook al experimenten uitgevoerd waar de genen die instaan voor de thc-pathway te transfereren naar andere planten, met succes! sterker nog ze hebben deze genen ook kunnen transferen naar dierlijke cellen. binnenkort dus THC-rijke appeltjes op de markt . als je goed kijkt zie je dat het scheutje boven op een zaailing lijkt. op de onderste foto maakt het geen kiemblaadjes. dit komt omdat op de onderste foto jonge bladfragmententjes zijn gebruikt als explantaat. op de bovenste foto is dat een stukje jonge stengel. dit bedoelde ik in een vorige post. het explantaat voorziet nog zijn eigen hormoonregeling door een goed gedifferentieerd anabolisme en catabolisme. in principe kan je dus ook werken met afzonderlijke meristeemcellen alleen valt dan de hormoonregeling van het macroscopische explantaat weg waardoor alles veel moeilijker te reguleren valt. het is dus allemaal zeer interessant. en je kan het gewoon thuis proberen! de voedingsbodems kan je gewoon bestellen online. dit wordt geleverd in poedervorm. dit meng je dan in gedeminiraliseerd water samen met agar als dikkingsmiddel. boeltje steriliseren en in pertischaaltjes gieten. je hebt dus 2 soorten voedingbodems nodig. één voor callus ontwikkeling en een andere voor root en shoot initiatie. je moet dan het callus en shoot medium kiezen voor carrots (wortel). grtzz Quote Share this post Link to post Share on other sites
kasperfish 0 Posted July 4, 2009 hieronder nog een paar foto's van een okselknoop die meteen op een root en shoot medium werd gecultiveerd. dus hier hebben ze dus geen callus gevormd. rechtstreeks kloontjes maken vanuit het meristeem in een okselknoop. je ziet dat het plantje minder gestrest is dan wanneer je vanuit callus kweekt. dit is omdat er met een stukje werkend plantenmateriaal wordt gestart (een okselknoop) met een eigen hormoonhuishouding. in vitro zijn dan alleen hormonen nodig die shoot en root vorming initiëren. het is ook mogelijk om dit via een stukje blad te doen maar dan moet er veel meer gereguleerd worden omdat een blad van nature uit geen sheut-eigenschappen heeft, een oksel wel. dus als je met stukjes blad of stengel wil werken moet je eerst callus vormen zoals hierboven op de foto's. met de juiste hormonen en groeifactoren kan je dus bepalen hoe de calluscellen uitgroeien. enkele mogelijkheden: * rechtstreeks zaadjes produceren in vitro * vrouwelijke bloemen maken in vitro * THC-producerende cellen opkweken in vitro dat laatste vind ik wel cool. dan heb je een pot waar een klomje THC in "groeit" Quote Share this post Link to post Share on other sites
