Ga naar inhoud


Tissue Culture


96 replies to this topic

#21 banaantjuh

    ACTIEF/AVOCADOTIEF OP WF!

  • Members
  • Pip Pip Pip Pip Pip
  • 1865 Posts:

Gepost 09 oktober 2009 - 11:44

Goed bezig!
Heb me er in ge´nteresseerd sinds het bij biologie voorbij kwam :rolleyes:
Een beetje verder in ingelezen.

Echt tof dat het nu ook op het forum gaat gebeuren! :verrygood

Veel succes,

Banaan

EDIT: wellicht even dvd afspelen met ander programma?
321 media player: http://www.topshareware.com/free-download-...downloads/1.htm
VLC: http://www.videolan.org/vlc/

#22 Snowy

    Labrat

  • Members
  • Pip Pip Pip
  • 860 Posts:

Gepost 09 oktober 2009 - 13:49

Leuk dat het nu echt los gaat in de weefsel kweek.. Maar is zo'n kit niet meer iets voor een eerste kennismaking? Ik bedoel je hebt niet de specifieke hormonen (wil nog wel verschillen qua houdbaarheid, prijs en effect per plant) welke allicht nodig zijn voor de culture van ons geliefde plantje.
Het protocol en het boekje (met waarsch een aantal medium samenstellingen) ben ik zelf ook best wel benieuwd naar, want dat kan ook per plant en doel van de tissue culture verschillen. Al met al ben ik heel benieuwd naar de mogelijkheden die de kit van DOC bieden zal :lol: :verrygood

Now it's make or break time :rolleyes:

Succes!
Laters, Snowie
Lid van de KTM fanclub

#23 TissueTeler

    Kind aan huis lid

  • Members
  • Pip Pip
  • 137 Posts:

Gepost 09 oktober 2009 - 14:42

Snowy,

Ja het gaat echt om een beginners kit.
Maar wel leuk om te kijken wat je er mee kan.
En om mensen te laten zien wat TC is.

Ik zal parallel test gaan doen om te kijken of leuke differentiatie kunnen induceren.
In eerste instantie beetje spelen met IAA en BA concentratie.

Voor Tips en ideeen sta ik altijd open. :verrygood
Hosea 6:11 Ook jij, Juda, zult oogsten wat je hebt gezaaid.
Test: Tissue Culture

#24 Doc

    this is my playground

  • Full member
  • Pip Pip Pip Pip Pip Pip
  • 8847 Posts:

Gepost 11 oktober 2009 - 17:42

kan niet wachten op een update :verrygood

#25 whazzup

    Smoke he does

  • Full member
  • Pip Pip Pip Pip Pip Pip Pip Pip
  • 21267 Posts:

Gepost 11 oktober 2009 - 17:47

wat voor plantmateriaal ga je gebruiken?

#26 Worm

    ...(_)...

  • Full member
  • Pip Pip Pip Pip
  • 1467 Posts:

Gepost 13 oktober 2009 - 10:58

Ben je al van start??? :verrygood

Dampende groet,

WOrm
Smokestack lightning

#27 TissueTeler

    Kind aan huis lid

  • Members
  • Pip Pip
  • 137 Posts:

Gepost 13 oktober 2009 - 15:12

Sorry worm,

Was even vertraging in gekomen.

Ik wou vooraf DVD zien. Omdat ze de inhoud van het pakket aangepast hebben.

Deze komt dus niet meer geheel over een met wat in de handleiding staat.

Moest het helaas ff verplaatsen naar Donderdag. I.v.b met verplichtingen van vandaag.


En morgen natuurlijk horti fair.
Hosea 6:11 Ook jij, Juda, zult oogsten wat je hebt gezaaid.
Test: Tissue Culture

#28 TissueTeler

    Kind aan huis lid

  • Members
  • Pip Pip
  • 137 Posts:

Gepost 17 oktober 2009 - 16:39

Bekijk Post whazzup, op 11 Oct 2009, 18:47, zei:

wat voor plantmateriaal ga je gebruiken?

Weefselkweek werkplan
We gaan bij deze experiment proberen om callus op te kweken van bijv. de petiole (nerve) van de
cannabisplant. Dit omdat bij eerdere onderzoeken is geconcludeerd dat dit de hoogste callus yield
oplevert.

Mogelijke explant bronnen zoals:
  • petiole
  • bloemknop
  • oksel
  • blad
  • shoot apicale meristem (bevat stamcellen), dit zijn primordia van organen zoals de bloem en
    blad
  • florale meristem, ontstaat door een conversie van shoot apicale meristem, onder invloed van een
    koudere temperatuur (volgens de literatuur: een paar dagen tussen 0 en 10 graden) en minstens
    8,5 uur donker per etmaal. Dit zorgt dat de explant wordt aangezet tot bloe en dus zich
    concentreert op bloemen.

Medium
Bereiding moet ik nog uit typen

Verdeel de medium over de petrischaaltjes. Om ervoor te zorgen dat het 100% steriel is moeten de
schaaltjes nu in een autoclaaf worden behandeld op 121 graden en 15 minuten, volgens eerdere
onderzoeken. Omdat we dit niet kunnen doen, gebruiken we een snelkookpan.

Procedure
  • Neem een explant
  • Zet ze in bleekoplossing voor 10 minuten (10% huishoudelijk) om de oppervlak te steriliseren
  • Desinfecteer de werktafel
  • Vul drie bakjes met gedistilleerd water
  • Dompel het pincet in 70% alcohol, steriliseer het door het eventjes boven vuur te houden en dus
    de alcohol eraf te branden, laat het afkoelen en gebruik het vervolgens om de explantjes van de
    bleekoplossing te pakken en in elk van de drie bakjes met schoon water te reinigen. Je hebt dus
    drie 'washes'.
  • Steriliseer ook het mesje met de vlam, laat het afkoelen en gebruik het om de randjes van de
    explant tot 1 mm eraf te snijden, aangezien dit deel dood is gegaan in de bleekoplossing door
    het direct contact.
  • Gebruik het pincet om een explantje in de groeimedium te plaatsen. Druk het heel licht in het medium.
  • Zet de kweekbakjes in een warme en goed belichte lokatie. In geval van contaminatie zijn
    micro-organisme kolonieen binnen een week te zien.

Hosea 6:11 Ook jij, Juda, zult oogsten wat je hebt gezaaid.
Test: Tissue Culture

#29 lowieke

    Hang hier wat rond lid

  • Members
  • Pip
  • 53 Posts:

Gepost 17 oktober 2009 - 17:59

Vette topic Tissue T.

Ik zag dat plaatje van die gammakast met ingebouwde tl balken.
laat ik dat idee nou net ook in mijn hoofd hebben.

ga dit zeker volgen. :lol:

gtrz low

#30 TissueTeler

    Kind aan huis lid

  • Members
  • Pip Pip
  • 137 Posts:

Gepost 17 oktober 2009 - 18:51

Bekijk Post lowieke, op 17 Oct 2009, 18:59, zei:

Ik zag dat plaatje van die gammakast met ingebouwde tl balken.
laat ik dat idee nou net ook in mijn hoofd hebben.
Ja dat werkt echt super goed.

Ik heb deze tl bakken gebruik.
TL montagebalk.
Die zijn even breed als de kast.
Hosea 6:11 Ook jij, Juda, zult oogsten wat je hebt gezaaid.
Test: Tissue Culture

#31 TissueTeler

    Kind aan huis lid

  • Members
  • Pip Pip
  • 137 Posts:

Gepost 17 oktober 2009 - 19:20

Zo net even media gemaakt:
Geposte afbeelding

1. Begonnen met demin water:
Geposte afbeelding

2. Suiker afgewogen:
Geposte afbeelding

3. MS + vitamine toegevoegd.
Geposte afbeelding

4. Hormonen en Conserveermiddel toegevoegd.
Geposte afbeelding

5. Medium toegevoegd:
Geposte afbeelding

6. Old school pH papier gebruikt uit de kit:
Geposte afbeelding
Ik heb de pH bijgesteld (pH- HPO4).

7. Dit heb ik gecontroleerd met behulp van pH meter. Ik zat op een pH 5.1. Misschien dat ik scheel ben maar ja.
Dit heb ik met behulp van pH+ KOH. Bijgesteld tot 5.8
Geposte afbeelding

8. Ik heb de bakjes klaar gezet:
Geposte afbeelding

9. Vervolgens heb ik het medium voor 8 min in de magnetron gedaan.

10. Met behulp van een 25 ml pipet heb ik de bakjes gevuld.
Geposte afbeelding
Geposte afbeelding

11. Bakjes in de snelkookpan gedaan.
Geposte afbeelding

12. 50% van de bakjes gesteriliseerd met UV lamp
Geposte afbeelding
Hosea 6:11 Ook jij, Juda, zult oogsten wat je hebt gezaaid.
Test: Tissue Culture

#32 lowieke

    Hang hier wat rond lid

  • Members
  • Pip
  • 53 Posts:

Gepost 17 oktober 2009 - 19:28

Ziet er veel belovend uit dit.

Heb je zeker vaker gedaan :wacko:

bedankt voor die tip van de tl's. ik heb jammer genoeg al armatuurtjes van de gamma.
Die gaan ook wel werken, maar die je net liet zien zijn toch geschikter.

waarvan ga je kweekjes nemen dan, ik neem aan dat je 1 of meerdere soortjes gaat opkweken.

cool dit, cannalogie 1op1

:lol:

grt low

#33 TissueTeler

    Kind aan huis lid

  • Members
  • Pip Pip
  • 137 Posts:

Gepost 17 oktober 2009 - 19:34

Bekijk Post lowieke, op 17 Oct 2009, 20:28, zei:

waarvan ga je kweekjes nemen dan, ik neem aan dat je 1 of meerdere soortjes gaat opkweken.

Ik heb nu helaas maar twee soortjes tot mijn beschikking. :lol:
NLX en Silver Haze.
Mocht iemand op het forum nog wat exotische soortjes hebben.

Zou het super mooi zijn als ik hier wat kleine stukjes van kan krijgen.
Voor TT heb je niet echt veel nodig. :wacko:

Je kan me eventueel een PM sturen. Het zou het makkelijkst zijn als we ergen in ZH kunnen afspreken.
Hosea 6:11 Ook jij, Juda, zult oogsten wat je hebt gezaaid.
Test: Tissue Culture

#34 TissueTeler

    Kind aan huis lid

  • Members
  • Pip Pip
  • 137 Posts:

Gepost 17 oktober 2009 - 21:00

13. Media 30, 40, 45 en 50 min in de snelkookpan.
Geposte afbeelding

Foutendiscussie:
1. Het medium dat 30 minuten in de snelkookpan heeft gezeten is niet hard geworden. :wacko:
2. Het medium dat 40, 45 en 50 min heeft gekookt wel. :lol:
Hosea 6:11 Ook jij, Juda, zult oogsten wat je hebt gezaaid.
Test: Tissue Culture

#35 Doc

    this is my playground

  • Full member
  • Pip Pip Pip Pip Pip Pip
  • 8847 Posts:

Gepost 17 oktober 2009 - 21:25

Bekijk Post TissueTeler, op 17 Oct 2009, 20:34, zei:

Zou het super mooi zijn als ik hier wat kleine stukjes van kan krijgen.
Voor TT heb je niet echt veel nodig. :lol:

Je kan me eventueel een PM sturen.

Ik weet niet of het gaat lukken om een stukje weefsel via pm te sturen :wacko:

#36 TissueTeler

    Kind aan huis lid

  • Members
  • Pip Pip
  • 137 Posts:

Gepost 17 oktober 2009 - 21:29

Bekijk Post Doc, op 17 Oct 2009, 22:25, zei:

Ik weet niet of het gaat lukken om een stukje weefsel via pm te sturen :wacko:
Daar wordt aan gewerkt.
Volgens mij zit dat in de volgende versie van het Forum :lol: .
Hosea 6:11 Ook jij, Juda, zult oogsten wat je hebt gezaaid.
Test: Tissue Culture

#37 TissueTeler

    Kind aan huis lid

  • Members
  • Pip Pip
  • 137 Posts:

Gepost 19 oktober 2009 - 19:00

14. Zo we kunnen beginnen. Alles eerst even opgesteld.
Geposte afbeelding

15. Ik heb eerst de stukjes weefsel klein gesneden.
Geposte afbeelding

16. Weefsel 10 min gewassen in een oplossing van 10% chloor.
17. Vervolgens 30 sec in een 70% alcohol oplossing gewassen.
18. Daarna 3x gespoeld met gesteriliseerd water.
Geposte afbeelding
Hosea 6:11 Ook jij, Juda, zult oogsten wat je hebt gezaaid.
Test: Tissue Culture

#38 guesswho?

    MEETING DIE-HARD en ouwe bong tokert

  • Members
  • Pip Pip Pip Pip Pip Pip
  • 4182 Posts:

Gepost 19 oktober 2009 - 19:29

Ik neem aan dat je gelijk verder bent gegaan met stap 19?
Het weefsel plaatsen in het medium
Of ben ik te snel?

Grtz Guesswho?
Cannabis kweken is als topsport bedrijven ,
alle omstandigheden moeten optimaal zijn om de beste prestaties te bereiken

Ik kweek "iets"

#39 TissueTeler

    Kind aan huis lid

  • Members
  • Pip Pip
  • 137 Posts:

Gepost 19 oktober 2009 - 19:57

Foto's komen er zo aan. Ben ff flimpje aan het kijken.

Was nog best inspannend werkje.
Hosea 6:11 Ook jij, Juda, zult oogsten wat je hebt gezaaid.
Test: Tissue Culture

#40 guesswho?

    MEETING DIE-HARD en ouwe bong tokert

  • Members
  • Pip Pip Pip Pip Pip Pip
  • 4182 Posts:

Gepost 19 oktober 2009 - 19:58

Dat geloof ik graag
Maar het ziet er zeer vakkundig uit zeg!

Is de film ook ergens online te bewonderen?
Of te downloaden...

Grtz Guesswho?
Cannabis kweken is als topsport bedrijven ,
alle omstandigheden moeten optimaal zijn om de beste prestaties te bereiken

Ik kweek "iets"